Häufig gestellte Fragen zu Zellkulturmedien

1. Wie wähle ich ein geeignetes Medium für meine Zellen aus?

Primäre Referenz: Das Medium, das zur Etablierung der spezifischen Zelllinie verwendet wurde, ist in der Regel die erste Wahl. Konsultieren Sie die entsprechende Literatur oder Ihren Zelllieferanten.
Basierend auf Zelltyp und Experiment:
- Mauszelllinien werden oft kultiviert in RPMI1640.
- Für Zellhybridisierung, Gentransfer-Experimente, IMDM kann gewählt werden.
Empirische Methode (empfohlen): Kultivieren Sie Zellen in mehreren Medientypen und vergleichen Sie die Ergebnisse anhand von Indikatoren wie Wachstumskurven und Beschichtungseffizienz, um das optimale Medium auszuwählen.
Konsultieren Sie maßgebliche Datenbanken: Die ATCC (Amerikanische Typkultursammlung) Die Website bietet detaillierte Informationen zur Kultivierung der meisten Zelllinien, einschließlich empfohlener Medien, Bedingungen und zugehöriger Literatur.

2. Kann flüssiges Medium bei -20 °C gelagert werden?

Nein. Bei Lagerung bei -20 °C können Salze im Medium ausfallen. Beim Auftauen lösen sich diese Salze möglicherweise nicht vollständig wieder auf, was zu einer Abnahme der Osmolarität führt. Dies kann zum Platzen und Absterben von Zellen führen.

3. Wie lange ist frisch zubereitetes Flüssigmedium haltbar?

Es wird empfohlen, frisch zubereitetes Medium bei 4°C, lichtgeschützt und benutze es innerhalb einer Woche. Je frischer das Medium, desto besser.

4. Kann mit Serum und Antibiotika angereichertes Medium langfristig gelagert werden?

Nein. Sobald Serum und Antibiotika zu frischem Medium hinzugefügt wurden, sollte es innerhalb zwei bis drei Wochen. Einige Antibiotika und wichtige Bestandteile des Serums beginnen nach dem Auftauen abzubauen.

5. Warum wird im Kühlschrank gelagertes Medium dunkelrot (alkalisch)?

Bei Lagerung bei 4°C CO₂ entweicht allmählich aus dem Medium, wodurch der pH-Wert steigt (alkalischer wird). Der pH-Indikator Phenolrot unter alkalischen Bedingungen wird es dunkler rot-violett.
Lösung: Der pH-Wert kann durch Blasenbildung eingestellt werden filtersterilisiertes CO₂ durch das Medium vor der Verwendung.

6. Ist es notwendig, dem Medium Antibiotika hinzuzufügen?

Generell nicht zu empfehlen. Um eine Maskierung subtiler Verunreinigungen oder eine zytotoxische Wirkung auf die Zellen zu vermeiden, sollten Routinekulturen keine Antibiotika zugesetzt werden.
Ausnahme: Um eine bakterielle/pilzliche Kontamination zu verhindern, Penicillin-Streptomycin (Pen-Strep) kann zugegeben werden. Gängige Endkonzentrationen sind 100 U/ml Penicillin und 100 µg/ml Streptomycin.

7. Sollte die Antibiotikakonzentration für die serumfreie Kultur angepasst werden?

Ja, reduzieren Sie die Menge. Die Antibiotikakonzentration sollte reduziert werden um mindestens 50% im Vergleich zu der in serumhaltigen Medien verwendeten Konzentration. Serumproteine binden und inaktivieren einige Antibiotika; diese Inaktivierung tritt unter serumfreien Bedingungen nicht auf.

8. Warum wird für einige Experimente ein phenolrotfreies Medium benötigt?

Zwei Hauptgründe:
1. Hormonelle Wirkungen: Phenolrot kann die Wirkung von Steroidhormonen (insbesondere Östrogen) nachahmen und so Experimente mit hormonempfindlichen Zellen beeinträchtigen.
2. Störung der Erkennung: Die Fluoreszenzeigenschaften von Phenolrot können Nachweismethoden wie die Durchflusszytometrie beeinträchtigen.

9. Welche Funktionen haben gängige Medienkomponenten?

NaHCO₃ (Natriumbicarbonat): Bildet mit CO₂ ein Puffersystem, um einen stabilen pH-Wert im Inkubator aufrechtzuerhalten.
Natriumpyruvat: Dient als alternative Kohlenstoffquelle für Zellen (bei niedrigem Glukosespiegel). Die übliche Endkonzentration beträgt 1 mM.
HEPES: Ein wirksamer chemischer Puffer, der für zusätzliche pH-Stabilisierung sorgt, insbesondere außerhalb der CO₂-Inkubatorumgebung. Die übliche Endkonzentration beträgt 25 mM.
Phenolrot: Wirkt als pH-Indikator (Rot = Neutral ~7.4, Gelb = Sauer, Lila = Alkalisch).
L-Glutamin: Eine essentielle Aminosäure für Zellen, die am Energiestoffwechsel und der Proteinsynthese beteiligt ist. Es ist instabil in Lösung und muss gefroren gelagert werden bei -20 ° C. Es wird typischerweise kurz vor Gebrauch dem Medium zugegeben. Die übliche Endkonzentration beträgt 2 mM. Mit Glutamin angereichertes Medium sollte erneut angereichert werden, wenn es länger als 2 Wochen.

10. Wie wirkt sich der pH-Wert des Mediums auf das Zellwachstum aus?

Der optimale pH-Wert für die meisten Zellen beträgt 7.2 - 7.4Abweichungen von diesem Bereich können schädlich sein.
Zellen tolerieren im Allgemeinen milde Säure besser als milde Alkalität.
Hinweis: Der pH-Wert einer Flüssigkeit steigt oft um ~ 0.2 Einheiten nach Filtration durch einen 0.1µm- oder 0.2µm-Filter.

11. Warum erscheint unser RPMI 1640-Medium gelb? Ist der pH-Wert falsch?

Das ist normal. RPMI 1640 ist aufgrund seiner Formulierung eine phenolarme Rotvariante; es enthält nur ein Viertel die Menge an Phenolrot in DMEM. Die hellere, gelbliche Farbe ist auf diese geringere Konzentration zurückzuführen und nicht auf einen falschen niedrigen pH-Wert.