HCY™ 96 DNA-RNA-Extraktionskit

Selbstverständlich. Ich informiere Sie gerne ausführlich über die HCY™ 96 DNA/RNA-Extraktionskit.

Dies ist ein Hochdurchsatz-Kit zur Nukleinsäureextraktion, das für den Einsatz in Laboren entwickelt wurde, die eine große Anzahl von Proben verarbeiten, beispielsweise in der klinischen Diagnostik, der Pathogenerkennung und der Genomforschung.

Hier finden Sie eine umfassende Aufschlüsselung der Funktionen, Prinzipien, typischen Vorgehensweisen und Anwendungen.

Übersicht

Die HCY™ 96 DNA/RNA-Extraktionskit ist eine auf Basis magnetischer Perlen Reinigungssystem formatiert für 96-Well-PlattenEs ermöglicht die gleichzeitige Reinigung von sowohl DNA als auch RNA aus einer einzigen Probe in einem automatisierten oder halbautomatisierten Arbeitsablauf. Dies ist entscheidend für Anwendungen wie den Nachweis von Krankheitserregern (z. B. SARS-CoV-2, Influenza, Respiratorisches Synzytialvirus), bei denen es üblich ist, aus einer Probe auf mehrere Ziele zu testen.

Hauptfunktionen

1. Hoher Durchsatz: Entwickelt für 96-Well-Platten, ideal für die gleichzeitige Verarbeitung von 96 Proben. Kompatibel mit automatisierten Liquid-Handling-Plattformen und Magnetperlenprozessoren.
2. Doppelte Extraktion: Effiziente Co-Extraktion beider genomische DNA und Gesamt-RNA aus einem einzigen Probenlysat. Dies spart Zeit, Reagenzien und Probenmaterial.
3. Magnetperlentechnologie: Verwendet eine magnetische Perlenmatrix auf Siliciumdioxidbasis zur Bindung von Nukleinsäuren. Diese Methode ist im Vergleich zu herkömmlichen Spin-Column-Methoden für ihre hohe Reinheit, Ausbeute und einfache Automatisierung bekannt.
4. Hohe Reinheit und Ausbeute: Die optimierten Puffer und Waschschritte entfernen Inhibitoren wie Proteine, Salze und andere Verunreinigungen, was zu hochwertiger DNA und RNA führt, die für empfindliche nachgelagerte Anwendungen geeignet ist.
5. Schnelles Verfahren: Der gesamte Vorgang kann für eine volle 96-Well-Platte in 20–40 Minuten abgeschlossen werden, abhängig von der verwendeten Automatisierungsausrüstung.
6. Breite Probenkompatibilität: Kann mit einer Vielzahl von Probentypen verwendet werden, darunter:
   • Abstrichproben (Nasopharyngeal, Oropharyngeal)
   • Serum / Plasma
   • Zellkulturüberstände
   • Gewebehomogenate
   • Körperflüssigkeiten

Prinzip der Methode

Das Kit funktioniert nach dem Prinzip der Nukleinsäurereinigung mit Silica-Magnetbeads:

1. Lyse: Die Probe wird mit einem stark chaotropen Salzpuffer (in der Regel Guanin-HCl oder Guaninthiocyanat enthaltend) lysiert. Dieser Puffer denaturiert Proteine, inaktiviert Nukleasen (RNasen und DNasen) und setzt Nukleinsäuren (DNA und RNA) in die Lösung frei.
2. Binding: In Gegenwart des Lysepuffers und einer Bindungslösung binden Nukleinsäuren spezifisch an die Oberfläche der silikabeschichteten Magnetkügelchen. Die chaotropen Salze zerstören die Wasserstruktur und ermöglichen so die Interaktion des negativ geladenen Phosphatrückgrats der Nukleinsäuren mit der positiv geladenen Silikaoberfläche.
3. Aufnehmen und Waschen: Ein Magnetstativ (oder ein Magnetstab in einem automatisierten System) wird verwendet, um die Bead-Nukleinsäure-Komplexe an der Wand des Röhrchens/der Platte zu immobilisieren. Der Überstand wird entfernt und die Beads werden 2-3 Mal mit ethanolhaltigen Waschpuffern gewaschen. Diese Waschvorgänge entfernen Salze, Proteine, Lipide und andere Verunreinigungen, ohne die Nukleinsäuren zu eluieren.
4. Elution: Nach einem abschließenden Waschen und vollständigen Trocknen zur Entfernung von Ethanolresten werden die reinen Nukleinsäuren mit einem salzarmen Puffer (z. B. TE-Puffer oder nukleasefreies Wasser) von den Kügelchen eluiert. Der Elutionspuffer unterbricht die Wechselwirkung zwischen Kieselsäure und Nukleinsäuren und setzt sie in die endgültige saubere Lösung frei.

Typischer Arbeitsablauf (vereinfacht)

1. Lysat vorbereiten: Mischen Sie die Probe mit Proteinase K (falls erforderlich) und Lysepuffer. Inkubieren Sie, bis die Lyse abgeschlossen ist.
2. Binden: Das Lysat in eine 96-Well-Deep-Well-Platte überführen. Magnetische Beads und Bindungslösung hinzufügen. Gründlich mischen, damit die Nukleinsäuren an die Beads binden können.
3. Aufnahme: Stellen Sie die Platte auf einen Magnetständer, bis die Lösung klar wird. Saugen Sie den Überstand ab und verwerfen Sie ihn.
4. Waschgang 1: Waschpuffer 1 hinzufügen, mischen, um die Perlen erneut zu suspendieren, auf dem Magneten einzufangen und den Überstand zu verwerfen.
5. Waschgang 2: Waschpuffer 2 hinzufügen, mischen, auffangen und den Überstand verwerfen.
6. Trocken: Lassen Sie das Perlenpellet einige Minuten an der Luft trocknen, um sicherzustellen, dass der gesamte Ethanol aus dem Waschpuffer verdunstet ist.
7. Eluieren: Elutionspuffer hinzufügen, gründlich mischen, einige Minuten inkubieren und die Kügelchen auffangen. Der Überstand enthält nun die gereinigte DNA/RNA und wird in eine neue Platte oder ein neues Röhrchen überführt.

Downstream-Anwendungen

Die mit diesem Kit extrahierte hochwertige DNA und RNA eignet sich für eine breite Palette empfindlicher molekularbiologischer Anwendungen:

• Echtzeit-RT-PCR (qRT-PCR): Die primäre Anwendung, insbesondere zur Virenerkennung (z. B. COVID-19-Test).
• PCR
• Sequenzierung der nächsten Generation (NGS)
• Microarray-Analyse
• Wurzelstimulatoren
• Molekulare Diagnostik

Zusammenfassung

Die HCY™ 96 DNA/RNA-Extraktionskit ist ein leistungsstarkes Werkzeug für moderne Molekularlabore, die Effizienz, Skalierbarkeit und Zuverlässigkeit benötigen. Das 96-Well-Format mit magnetischen Perlen ist der Industriestandard für Hochdurchsatz-Diagnostik- und Forschungslabore und ermöglicht die schnelle und genaue Vorbereitung von Nukleinsäuren für kritische nachfolgende Analysen.

Haftungsausschluss: Um das genaueste und spezifischste Protokoll zu erhalten, beachten Sie immer die offiziellen Anweisungen des Herstellers, die dem Kit beiliegen.