MEM-Kulturmedium (Minimum Essential Medium)

MEM-Kulturmedium (Minimum Essential Medium) wird auch Minimum Essential Medium, Minimum Basic Medium oder Low Limited Eagle Medium genannt. Es wird von Harry Eagle auf Basis von Eagle Basic Medium (BEM) entwickelt. Es ist eines der grundlegendsten und anwendbarsten Medien mit der größten Bandbreite. Es ist eines der am häufigsten verwendeten Medien in tierischen Zellkulturen, einschließlich HeLa, BHK-21, 293, HEP-2, HT-1080, McF-7, Fibroblasten und primären Rattenastrozyten. MEM-Kulturmedium enthält nur 12 essentielle Aminosäuren, Glutamin und 8 Vitamine. Es ist einfach in der Zusammensetzung und wird hauptsächlich für die Kultur adhärenter Zellen verwendet. Nach Modifikation der Rezeptur kann es auch für die Kultur anderer Zelltypen verwendet werden.

Inhaltsstoffe des MEM-Kulturmediums

L-Glutamin (Glutamin)

L-Glutamin (Glutamin) ist ein essentielles Nährstoffelement in der Zellkultur, aber es ist in Lösung instabil und wird spontan abgebaut. Die Menge an L-Glutamin kann gemäß den Forschungsanforderungen des Mediums ohne L-Glutamin beliebig angepasst werden, und die Zugabe von frischem L-Glutamin oder seinen Ersatzstoffen zum Zeitpunkt der Verwendung ist vorteilhafter für das Zellwachstum.

L-Alanyl-L-Glutamin (Ala-Glu), auch bekannt als Alanyl-Glutamin und Alanyl-Glutamyl-Dipeptid, ist ein fortschrittlicher Zellkulturzusatz, der L-Glutamin im Zellkulturmedium direkt ersetzen kann. L-Glutamin ist ein essentieller Nährstoff in der Zellkultur, aber es ist in Lösung instabil und wird es in Lösung instabil und wird spontan abgebaut, um Ammoniak und Pyroglutaminsäure zu produzieren, von denen Ammoniak für Zellen schädlich ist, wohingegen L-Alanyl- L-Glutamin ist in wässriger Lösung sehr stabil und wird nicht spontan abgebaut. Der Mechanismus der zellulären Verwertung besteht darin, dass die Zellen während der Zellkultur allmählich eine Peptidase in das Kulturmedium freisetzen, um L-Alanyl-L-Glutamyl zu L-Alanin und L-Glutamin zu hydrolysieren, und dann werden die Zellen diese beiden Hydrolysen aufnehmen und nutzen Produkte. Der Prozess der zellulären Verwertung von L-Alanyl-L-Glutamyl ähnelt der Flow-Addition-Kulturstrategie, da dem Kulturmedium kontinuierlich geringe Mengen an L-Glutamin zugesetzt werden, wodurch die Verwertung von L-Glutamin erhöht wird, ohne einen Überschuss zu erzeugen Ammoniak, das dem Zellwachstum förderlicher ist. L-Alanyl-L-Glutamyl kann äquimolares L-Glutamin ersetzen, ist für alle Zellen geeignet, erfordert wenig Anpassung und kann die Zellkulturzeit verlängern. Es kann auch die Zellkulturzeit verlängern und die Anzahl der Passagen reduzieren, was Zeit und Geld spart. Zellen, die in mit L-Glutamin ergänztem Medium kultiviert wurden, zeigten eine langsamere Verringerung der Aktivität als diejenigen, die in einem mit L-Glutamin ergänzten Medium kultiviert wurden. Die etwas längere Verzögerungszeit ist auf die Zeit zurückzuführen, die für die Freisetzung von Peptidase und den Verdau des Dipeptids erforderlich ist.

NEAA (nicht essentielle Aminosäuren)

NEAA (Non-Essential Amino Acids), das sind 7 NEAAs von L-Alanin, L-Glutaminsäure, L-Asparagin, L-Asparaginsäure, L-Prolin, L-Serin und Glycin, die dem MEM-Medium hinzugefügt werden, können die Seite reduzieren Auswirkungen der zelleigenen Produktion von nicht-essentiellen Aminosäuren während der Zellkultur und fördern effektiv die Zellproliferation und den Stoffwechsel.

Die Glukose kann je nach Forschungsbedarf beliebig angepasst werden, was bequem und schnell ist. Medium mit hohem Zuckergehalt wird üblicherweise für schnell wachsende Zellen mit geringer Adhäsion, Myelomzellen von Hybridomen, klonale Zellen, transformierte Zellen der DNA-Transfektion, verschiedene primäre Viruswirtszellen, die Kultur von Einzelzellen und die Herstellung von Impfstoffen verwendet CHO-Zellen zur Expression von EPO und zur Herstellung von Hepatitis-B-Impfstoffen. Medium mit niedrigem Zuckergehalt eignet sich besser für die Kultur von langsamer metabolisierenden, adhärenten abhängigen Zellen.

HEPES ist ein ausgezeichneter biologischer Puffer, der keine toxische Wirkung auf Zellen hat. Das Medium mit HEPES kann einen konstanten pH-Bereich über einen längeren Zeitraum aufrechterhalten, wodurch wirksam verhindert werden kann, dass das Zellwachstum durch große pH-Schwankungen des Kulturmediums beeinträchtigt wird. Es kann in CO2-freien Inkubatoren verwendet werden.

Phenolrot wird als pH-Indikator im Kulturmedium verwendet, um den pH-Wert des Kulturmediums kontinuierlich zu überwachen. Phenolrot macht das Kulturmedium bei niedrigem pH-Wert gelb, bei höherem pH-Wert violett und bei pH-Werten von 7.2 bis 7.4 rot, was für die Zellkultur am besten geeignet ist. Allerdings hat Phenolrot auch einige Nachteile. Studien haben gezeigt, dass Phenolrot die Wirkung von Steroidhormonen (insbesondere Östrogen) nachahmen kann. Wenn Sie also östrogenempfindliche Zellen (wie Brustgewebe) verwenden, ist es am besten, ein Medium ohne Phenolrot zu verwenden. Phenolrot kann den Nachweis während der durchflusszytometrischen Analyse stören. Darüber hinaus kann das Vorhandensein von Phenolrot in einigen serumfreien Mediumformulierungen das Natrium-Kalium-Gleichgewicht stören.

Penicillin-Streptomycin-Lösung

Penicillin-Streptomycin-Lösung, allgemein auch als „duales Antibiotikum“ bezeichnet, ist das am häufigsten verwendete Antibiotikum in In-vitro-Kulturen, um eine mikrobielle Kontamination zu verhindern, wobei Penicillin in die bakterielle Zellwandsynthese eingreift und dabei besonders wirksam gegen grampositive Bakterien ist Streptomycin hemmt die bakterielle Proteinsynthese durch Bindung an die 30S-Untereinheit des bakteriellen Ribosoms und ist besonders wirksam gegen Streptomycin bindet an die 30S-Untereinheit des bakteriellen Ribosoms und hemmt die bakterielle Proteinsynthese, was sowohl gegen gramnegative als auch grampositive Bakterien wirksam ist, ist aber besonders wirksam gegen gramnegative Bakterien. Die Kombination von Penicillin und Streptomycin kann den größten Teil der bakteriellen Kontamination verhindern.

Dieses Produkt enthält Aminosäuren, Vitamine, anorganische Salze und viele andere Komponenten, die für die Multikultur von Zellen erforderlich sind, enthält jedoch keine Proteine, Lipide oder Wachstumsfaktoren, daher sollte das Produkt mit Serum oder serumfreien Zusätzen verwendet werden.

Hinweise

Dieses Produkt wurde gefiltert und debakteriiert und sollte bei aseptischem Betrieb mit Vorsicht verwendet werden, um eine Kontamination zu vermeiden.
Frieren Sie das Produkt nicht ein und tauen Sie es nicht ein, um die optimale Nutzung des Produkts zu gewährleisten.
Dieses Produkt ist nur für die wissenschaftliche Forschung oder weitere Studienzwecke bestimmt, nicht für die Diagnose oder Behandlung.