So verhindern Sie eine Aerosolkontamination in PCR-Laboren

Die Anwendung und Entwicklung der PCR-Technologie (Polymerase-Kettenreaktion) hat zu effektiveren Beweisen für die Krankheitsdiagnose geführt, insbesondere zur Förderung und Anwendung der quantitativen Fluoreszenz-PCR, die die Empfindlichkeit und Genauigkeit des Tests erheblich verbessert hat. Mit der weit verbreiteten Verwendung dieser Technologie in Labors zum Nachweis von Krankheitserregern hat das Problem der Aerosolkontamination in PCR-Labors jedoch allmählich Besorgnis erregt. Um eine DNA / RNA-Aerosolkontamination im PCR-Labor effektiv zu vermeiden, um stabile und zuverlässige Testergebnisse zu erhalten, um Fehlalarme zu vermeiden, legt das PCR-Labor strenge Maßnahmen zur Bekämpfung der Umweltverschmutzung und das entsprechende Verschmutzungsüberwachungssystem fest, um die Verschmutzung durch Aerosolkontamination zu verhindern, sobald das Aerosol gefunden wurde Verschmutzung, um zeitnah die Ursache und die entsprechende Lösung für das Verschmutzungsproblem zu finden.

Zonierung von Labors

Das PCR-Labor sollte gemäß den einschlägigen Vorschriften in vier Abschnitte unterteilt werden: Reagenzvorbereitungsabschnitt, Probenvorbereitungsabschnitt, PCR-Amplifikationsabschnitt und Produktanalyseabschnitt, wobei die ersten beiden Abschnitte der Voramplifikationsabschnitt und die letzten beiden Abschnitte der sind Post-Amplifikations-Bereich. Der Vorverstärkerbereich und der Nachverstärkerbereich sollten streng getrennt und mit Belüftung und Reinigung ausgestattet sein, um eine Druckdifferenz zwischen den Abschnitten zu bilden. Der Arbeitsablauf, einschließlich Versuchsmaterialien, Reagenzien, Aufzeichnungspapier, Stifte, Reinigungsmaterialien usw., kann nur von der Präamplifikationszone zur Postamplifikationszone fließen, dh von der Reagenzvorbereitungszone → Probenverarbeitungszone → Amplifikationszone → Produkt Analysezone und darf nicht in umgekehrter Richtung fließen. Es ist strengstens verboten, die Strömung im sauberen Korridor umzukehren, während zwischen jedem Abschnitt, dem entsprechenden Pufferraum und dem sauberen Korridor unterschiedliche Gradientendruckunterschiede gebildet werden, so dass der Luftstrom mit der Arbeitsrichtung übereinstimmt.

Steuerelemente einrichten

Zwei Negativkontrollen (beide mit Wasser als Vorlage, eine mit der an der Nukleinsäureextraktion beteiligten Probe und die andere nicht an der Extraktion beteiligte Probe, die erst bei der Konfiguration des Amplifikationssystems hinzugefügt wird) werden jedes Mal vor der Durchführung des Experiments zur Überwachung vorbereitet die Aerosolkontamination im Labor und stellen fest, ob eine Kontamination vorliegt und was diese verursacht, damit Maßnahmen zu ihrer Vermeidung und Beseitigung ergriffen werden können. Zur Überwachung der Zuverlässigkeit und Genauigkeit der experimentellen Ergebnisse sollte auch eine positive Kontrolle eingesetzt werden.

Überwachung von Laboraerosolen

Laborluft wird regelmäßig mit einem Heimluftreiniger gereinigt, der Filter im Reiniger in Wasser getaucht, gemischt und das gemischte Wasser als Probe für entsprechende Tests verwendet, um die Belastung durch Aerosole in der Luft zu verfolgen. Sammeln Sie regelmäßig Proben von Wattestäbchen aus dem Inneren und der Oberfläche von Pipettenpistolen, Extraktoren, Verstärkern und anderen Instrumenten zu Testzwecken, um die Kontamination in experimentellen Instrumenten zu verstehen.

Strict-Workflow

Jeder Abschnitt des PCR ist mit einer eigenen Arbeitskleidung ausgestattet, die farblich unterschieden werden kann, und die entsprechende Arbeitskleidung muss beim Betreten jedes Abschnitts gewechselt werden; Inzwischen ist der Eingang des Reinkorridors mit speziellen Schuhen für den PCR-Raum ausgestattet, die beim Betreten gewechselt werden müssen, und Filzmatten sind vor jedem Abschnitt ausgestattet. Das Laborpersonal im sauberen Korridor kann nur aus der Richtung des Reagenzvorbereitungsbereichs in die Richtung des Ergebnisanalysebereichs gehen, und jeder Abschnitt ist mit unterschiedlichem Personal für den Betrieb ausgestattet, wenn die Bedingungen dies zulassen, um das Personal jedes Abschnitts zu vermeiden umeinander bewegen.

Verbessern Sie die Reinigung und Desinfektion

Eine gute Reinigung und Desinfektion des Labors ist ein wirksames Mittel, um eine Aerosolkontamination im Labor zu verhindern. Der Umfang der Laborreinigung umfasst die Reinigung von Arbeitsflächen (Prüfstände, Reinstbänke und Lagerschränke etc.), Oberflächen von Instrumenten und Geräten (Rotationsköpfe von Zentrifugen, Heizblöcke zur DNA-Extraktion, Probenschlitze von Verstärkern, Pipette Stäbchen zum Pipettieren, Spiking-Schlitze von Genanalysegeräten usw.), wiederverwendete Werkzeuge oder Utensilien usw.

Vor und nach Versuchsbeginn werden die Oberflächen der oben genannten Bereiche und Instrumente mehrfach mit frisch zubereiteter 10 %iger Natriumhypochloritlösung abgewischt und anschließend mit 75 %igem Ethanol zur Entfernung von Rückständen abgerieben, erst danach kann der Versuch durchgeführt werden der Alkohol ist verdunstet. Dadurch können die verschiedenen Schadstoffe, die an ihren Oberflächen haften, effektiv entfernt werden. Gleichzeitig wird das Labor regelmäßig durch UV-Lichtbestrahlung desinfiziert.