Pulverförmiges DMEM-Kulturmedium

DMEM wird auf Basis von MEM-Medium entwickelt. Verglichen mit MEM-Medium hat sich der Gehalt an Aminosäuren um das 2-fache und der Gehalt an Vitaminen um das 4-fache erhöht. Gleichzeitig wurden nicht-essentielle Aminosäuren, Spuren von Eisenionen und Natriumpyruvat hinzugefügt. Das DMEM-Medium wurde ursprünglich mit einem Glukosegehalt von 1000 mg/L (Typ mit niedrigem Zuckergehalt) entwickelt und entwickelte später einen Glukosegehalt von 4500 mg/L (Typ mit hohem Zuckergehalt), der bei der Kultivierung verschiedener Zellen weit verbreitet ist. Kulturmedium mit hohem Glukosegehalt wird häufig in schnell wachsenden Zellen mit geringer Adhäsion, Hybridom-Myelom-Zellen, geklonten Zellen, DNA-transfizierten transformierten Zellen, Wirtszellen verschiedener Primärviren, Einzelzellkultur und Impfstoffproduktion, wie z. B. CHO-Zellexpression, verwendet Produktion von EPO- und Hepatitis-B-Impfstoffen. Low-Glucose-Medium ist besser geeignet für die Kultur von Zellen mit langsamerem Metabolismus und abhängiger Adhärenz. Glukosefreies Medium kann die Glukosekonzentration nach Belieben je nach Forschungsbedarf anpassen, was bequem und schnell ist. DMEM enthält keine Proteine, Lipide oder Wachstumsfaktoren. Daher muss DMEM mit Nährstoffen ergänzt werden, normalerweise mit 10 % fötalem Rinderserum (FBS). DMEM verwendet ein Natriumbicarbonat-Puffersystem (3.7 g/l) und benötigt daher eine Umgebung mit 5-10 % CO2, um den physiologischen pH-Wert aufrechtzuerhalten. Für eine Vielzahl von Zellkulturanwendungen bieten wir modifizierte DMEM-Medien mit verschiedenen Komponenten sowie DMEM-Medien mit anpassbaren Komponenten an.

Bestandteile des pulverisierten DMEM-Kulturmediums

Dieses DMEM-Trockenpulver-Zellkulturmedium muss während der Vorbereitung mit Natriumbicarbonat ergänzt, auf den pH-Wert eingestellt und filtriert werden. Die genaue Formulierung lautet wie folgt:

1. Geben Sie 950 ml destilliertes Wasser in ein Mischgefäß so nahe wie möglich an das Endvolumen.
2. Geben Sie trockenes pulverisiertes Medium in Wasser mit Raumtemperatur (15 °C bis 30 °C) und rühren Sie vorsichtig um. Wasser nicht erhitzen.
3. Spülen Sie das Innere der Packung aus, um Pulverrückstände zu entfernen.
4. Fügen Sie dem Kulturmedium 50 ml einer 75 g/l NaHCO3-Lösung hinzu.
5. Stellen Sie den pH auf 0.2 bis 0.3 Einheiten unter dem gewünschten endgültigen Arbeits-pH ein, indem Sie langsam 1 N NaOH oder 1 N HCl zugeben und rühren. Der pH-Wert kann nach der Filtration um 0.1 bis 0.3 Einheiten ansteigen. Der empfohlene Arbeits-pH-Wert beträgt 7.0-7.4.
6. Verwenden Sie destilliertes Wasser, um das endgültige Volumen einzustellen.
7. Verarbeiten Sie das Kulturmedium sofort durch eine 0.2-µm-Filtermembran in sterile Behälter mit einem Überdruckfiltrationssystem.