Pulverförmiges M199-Medium

M199 eignet sich besonders für die Kultur nicht transformierter Zellen und wird auch häufig in der Virologie, der Impfstoffherstellung und der In-vitro-Kultur von primären Explantaten von Ratten-Pankreas-Epithelzellen und Maus-Linsengewebe verwendet. Verglichen mit anderen Basalmedien enthält M199 einzigartige Komponenten, darunter Adenin, Adenosin, Hypoxanthin, Thymin und andere Vitamine. M199 hat zwei ausgewogene Salzzusammensetzungen, die Salzzusammensetzung von Earle wird üblicherweise in einer CO2-Umgebung verwendet, die Salzzusammensetzung von Hank wird in einer Nicht-CO2-Umgebung verwendet. Das 199-Medium enthält keine Proteine, Lipide oder Wachstumsfaktoren. Medium 199 verwendet ein Natriumbicarbonat-Puffersystem (2.2 g/l) und benötigt daher eine Umgebung mit 5–10 % CO2, um den physiologischen pH-Wert aufrechtzuerhalten. Für eine Vielzahl von Zellkulturanwendungen bieten wir modifizierte M199-Medien mit verschiedenen Komponenten sowie M199-Medien mit anpassbaren Komponenten.

Inhaltsstoffe des pulverisierten M199-Mediums

Dieses M199-Trockenpulver-Zellkulturmedium muss während der Zubereitung mit Natriumbicarbonat ergänzt, auf den pH-Wert eingestellt und filtriert werden. Das detaillierte Vorbereitungsschema ist wie folgt:

1. Geben Sie 950 ml destilliertes Wasser in ein Mischgefäß so nahe wie möglich an das Endvolumen.
2. Füge trockenes Medium zu Wasser mit Raumtemperatur (15°C bis 30°C) hinzu und rühre leicht um. Wasser nicht erhitzen.
3. Spülen Sie das Innere der Packung aus, um Pulverrückstände zu entfernen.
4. Fügen Sie dem Medium 29.3 ml einer 75 g/l NaHCO3-Lösung hinzu.
5. Stellen Sie den pH auf 0.2 bis 0.3 Einheiten unter dem gewünschten endgültigen Arbeits-pH ein, indem Sie langsam 1 N NaOH oder 1 N HCl zugeben und rühren. Der pH-Wert kann nach der Filtration um 0.1 bis 0.3 Einheiten ansteigen. Der empfohlene Arbeits-pH-Wert beträgt 7.1-7.4.
6. Endvolumen mit destilliertem Wasser einstellen.
7. Verarbeiten Sie das Medium sofort durch die Membranfiltrationsfunktion eines 0.2-μm-Filters in einen sterilen Behälter unter Verwendung eines Überdrucksystems.